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首頁>產品中心>>鼎國昌盛>WB-0072RIPA 組織 / 細胞裂解液(強)
RIPA 組織 / 細胞裂解液(強)

簡要描述:

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。
注意事項 : 1.為獲得實驗效果,可適當分裝使用,以盡量避免反復凍融。 2.PMSF應現用現加。 3.裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。 4.蛋白酶抑制劑均有較高的毒性,為

更新時間:2018-08-01

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RIPA 組織 / 細胞裂解液 規格;50ml 編號;WB-0072  

產品簡介:RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。
RIPA裂解液(強)的主要成分為50mM Tris(pH7.4),150mM NaCl,1%Triton X-100,
1% sodium deoxycholate,0.1%SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,
leupeptin等多種抑制劑??梢杂行б种频鞍捉到?。
用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用本公司生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。
由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
包裝清單:

RIPA裂解液(強)50ml(-20℃保存)
PMSF(100×)550ul(-20℃保存)
使用說明書1份

 

使用說明:
取出裂解液,待融化后顛倒混勻數次,適量分裝凍存。
在使用前取出PMSF(100mM),按比例加入(使其zui終濃度為1mM)混勻,立即使用。
1、培養細胞:
(1)貼壁細胞:去除培養液,用PBS、鹽水或無血清培養液洗2-3遍
(如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗)。
按6孔板每孔加入100-200ul的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。
通常裂解液接觸細胞數秒后細胞就會被裂解。
(2)懸浮細胞:收集培養細胞,離心去除培養液,用PBS、鹽水或無血清培養液洗2-3遍
(如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗),
用手指把細胞用力彈散,按6孔板每孔細胞加入100-200ul的比例加入裂解液。
如果細胞數量較大,應按50-100萬細胞/管分裝或根據細胞數量按比例增加裂解液。
用手指輕彈管底以促進裂解液和細胞充分接觸,裂解完全時應無明顯的細胞顆粒。
裂解物經10,000-14,000g離心3-5min,取上清,即可進行后續的PAGE、Western、
免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經足夠,
但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。
2、組織樣品
取Ep管,分別稱重標記,把組織剪切成小塊裝入Ep管中,稱重。
按每20mg組織加100-200ul的比例加入裂解液(如裂解不完全,
可以適當增加用量;如需要的蛋白樣品濃度較高,可以適當減少用量)。
用手握式電動組織細胞勻漿器勻漿約1min或直至充分裂解。
10,000-14,000g離心3-5min,取上清,即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
如果組織樣品本身非常細小,如淋巴細胞,可直接加入裂解液,通過振蕩(Vortex)以使樣品裂解完全。
保存條件:
PMSF需-20℃保存,裂解液若經常使用,可于4℃保存至少三個月。若長期保存,建議置于-20℃,可保存一年。
裂解液中含有少量SDS,溫度低會有沉淀析出,屬于正?,F象,使用時37℃加熱溶解即可。
注意事項:
1、為獲得實驗效果,可適當分裝使用,以盡量避免反復凍融。
2、PMSF應現用現加。
3、裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
4、蛋白酶抑制劑均有較高的毒性,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
一旦直接接觸,請立即用流水沖洗,再向醫療保健結構咨詢。
常見問題分析:
細胞加入RIPA裂解液冰浴裂解后,離心,發現在液面附近有絮狀物產生,是什么原因?
答:一般是因為細胞裂解不完全造成的。
改善方法:
(1)加大裂解液的量和裂解時間。
(2)加入裂解液后冰浴稍微超聲處理,使其裂解完全。
一般來說,如果細胞裂解后變得澄清、不粘稠,這個時候再離心,就不會出現絮狀物了。

 

 


 

 

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